一、常用建模方法及操作步驟

1. 煙熏法（Cigarette Smoke Exposure, CSE）

• 操作流程：

• 將大鼠置于自制煙熏箱中，每日點(diǎn)燃香煙（如10支/次），進(jìn)行被動(dòng)吸煙（1-2次/天，每次30-60分鐘），持續(xù)24-36周。

• 煙熏期間需監(jiān)測(cè)箱內(nèi)溫度、濕度及空氣流速，避免缺氧或過(guò)熱。

• 特點(diǎn)：

• 接近人類自然病程，模擬吸煙導(dǎo)致的氣道炎癥、黏液分泌增加及肺氣腫。

• 周期長(zhǎng)（需≥8周），但病理特征穩(wěn)定，適用于長(zhǎng)期機(jī)制研究。

2. 蛋白酶滴注法（如彈性蛋白酶、木瓜蛋白酶）

• 操作流程：

• 麻醉大鼠后，經(jīng)氣管插管滴注蛋白酶（如豬胰彈性蛋白酶PPE 0.2-0.6 U/kg或木瓜蛋白酶6 U/kg），每周1次，持續(xù)4-20周。

• 特點(diǎn)：

• 快速誘導(dǎo)肺泡結(jié)構(gòu)破壞（4周可見(jiàn)肺大皰），適用于急性肺氣腫研究。

• 可能伴隨高死亡率，需嚴(yán)格劑量控制。

3. LPS聯(lián)合煙熏法（CSE+LPS）

• 操作流程：

• 煙熏基礎(chǔ)上，于第1、14、28天經(jīng)氣管滴注脂多糖（LPS 200 μg/只），總周期縮短至4-12周。

• 特點(diǎn)：

• 協(xié)同增強(qiáng)炎癥反應(yīng)（TNF-α、IL-8顯著升高），更接近中重度COPD。

• 操作復(fù)雜但時(shí)間效率高，適合藥物療效評(píng)價(jià)。

4. 多因素復(fù)合模型

• 方法：煙熏+LPS+蛋白酶（如PPE）或疊加空氣污染物（臭氧、二氧化硫）。

• 特點(diǎn)：

• 綜合模擬多致病因素（吸煙+感染+環(huán)境污染），病理改變更全面。

• 實(shí)驗(yàn)復(fù)雜度高，需多學(xué)科協(xié)作。

二、模型驗(yàn)證與評(píng)價(jià)指標(biāo)

1. 行為學(xué)與功能指標(biāo)

• 肺功能檢測(cè)：

• 強(qiáng)制呼氣流量（FEV50/FVC）下降、殘氣量（FRC）升高，提示氣流受限。

• 體重監(jiān)測(cè)：長(zhǎng)期煙熏組體重增長(zhǎng)緩慢。

2. 病理學(xué)指標(biāo)

• 肺泡結(jié)構(gòu)破壞：肺泡腔擴(kuò)張、間隔斷裂（HE染色）。

• 炎癥浸潤(rùn)：支氣管周圍巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞聚集（Masson染色）。

• 氣道重塑：膠原沉積、平滑肌增生（免疫組化檢測(cè)α-SMA）。

3. 分子生物學(xué)指標(biāo)

• 炎癥因子：血清IL-8、TNF-α顯著升高。

• 蛋白酶失衡：MMP-9/TIMP-1比值升高。

4. 影像學(xué)評(píng)估

• Micro-CT：肺大皰形成、局部密度減低，與病理結(jié)果一致。

三、不同建模方法的比較與選擇依據(jù)

四、注意事項(xiàng)與優(yōu)化策略

1. 動(dòng)物選擇：優(yōu)先雄性SD大鼠（體重180-250g），避免激素干擾。

2. 操作細(xì)節(jié)：

• LPS滴注時(shí)需緩慢注射，避免嗆咳導(dǎo)致藥物噴出。

• 煙熏箱設(shè)計(jì)需透明、通風(fēng)，確保煙霧均勻分布。

3. 環(huán)境控制：維持溫度22-25℃、濕度50-60%，減少非實(shí)驗(yàn)變量影響。

4. 替代與優(yōu)化：

• 基因編輯技術(shù)（如CRISPR敲除α-1抗胰蛋白酶基因）可模擬遺傳性COPD。

• 體外模型（氣液界面培養(yǎng)）用于高通量藥物篩選。